高压蒸汽灭菌锅
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高压蒸汽灭菌锅的使用解惑
问题的提出
高压蒸汽灭菌，用高温加高压灭菌，不仅可杀死一般的细菌、真菌等微生物，对芽孢、孢子也有杀灭效果，是最可靠、应用最普遍的物理灭菌法。在选修1教材技术实践中多次使用。
问题：高压蒸汽灭菌如何操作？需要注意哪些事项呢？
01?
高压蒸汽灭菌结构和原理
高压蒸汽灭菌器是利用饱和压力蒸汽对物品进行迅速而可靠地消毒灭菌的设备，适用于医疗卫生、科研、农业等单位。可对医疗器械、敷料、玻璃器皿、溶液培养基等进行消毒灭菌。
高压蒸汽灭菌器按照样式和大小分为手提式高压蒸汽灭菌器、立式高压蒸汽灭菌器、卧式高压蒸汽灭菌器等。手提式高压蒸汽灭菌器的容积通常为18L、24L、30L。立式高压蒸汽灭菌器的容积范围通常为30L-200L，进一步又可分为手轮型、翻盖型、智能型。智能型又分为 标准配置型、蒸汽内排型、真空干燥型。卧式高压蒸汽灭菌器通常为大型卧式高压灭菌锅。
高压蒸汽灭菌器由灭菌室、控制系统、过压保护装置等组成。
灭菌的原理是利用高温饱和水蒸汽在一定时间内可使微生物的蛋白质变性导致微生物死亡的功效，达到对耐湿耐热物品进行灭菌的目的。
温度上升的原理是由于在密闭的蒸锅内蒸汽不能外溢，随着压力不断上升水的沸点也会不断提高，从而锅内温度也随之增加，在0.1MPa压力下锅内温度可达121℃。在此蒸汽温度下可以很快杀死各种细菌。
02
灭菌操作程序
1.灭菌物品的包装和容器要合适
首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。需要灭菌的物品按需要分类包装，物品包装用线绳捆扎，以不松动散开为宜，不宜过紧，培养皿等器皿需要用牛皮纸包扎。
2.灭菌物品装放应合理
灭菌锅内物品不能过挤，不能超过锅内容量。尽量将同类物品装在同一锅内灭菌。若有不同类物品装放在一起，应以难达到灭菌物品的所需温度和时间为准。物品装放时，上下左右均应交叉错开，留出缝隙，使蒸汽容易穿透。大灭菌包应立着放上层，小包放下层，布类和金属类物品同时灭菌时，应将金属类物品包放在下层，使两者受热基本一致，并防止金属物品灭菌中产生的冷凝水弄湿包布。
加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
3.排尽冷空气
打开电源加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。使用高压蒸汽灭菌器时，最关键的是将锅内空气排尽。如锅内有空气，则气压针所指的压强不是饱和蒸汽产生的压强。相同的压强，混有空气的蒸汽其温度低于饱和蒸汽所产生的温度。因此完全排除锅内空气使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。
常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到0.05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。关阀再通电后，压力表上升达到0.1MPa时，开始计时，维持压力到指定的时间。
4.合理计算灭菌时间
待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。
灭菌时间包括：穿透时间，从锅内达到灭菌温度开始到锅内最难达到的部位也达到此温度所需要的时间；维持时间，即杀灭微生物所需要的时间，一般以杀灭嗜热脂肪杆菌芽胞所需时间来表示；安全时间，为使灭菌得到确切保证所需要增加的时间，一般为热死亡时间的一半，其长短视灭菌物品而定。
对易导热的金属器材的灭菌，不需要安全时间。在灭菌时间内，要注意观察压力表，以保持规定的压力，维持到灭菌时间为止。在灭菌过程中，如有压力、温度下降，应重新升温升压，重新计时。
5.开盖操作
达到灭菌时间后即可切断电源，一般当压力表的压力降至0之后，再打开排气阀。有时，在压力降到0.05MPa，可缓慢放出蒸汽，注意不要使压力降低太快，以致引起激烈的减压沸腾，使容器中的液体四溢。当压力降到零后才能开盖，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。取出培养基摆在平台上以待冷凝，不可以长久不取出，否则容易引起培养基成分变化以至无法制作斜面培养基。
如果因为久不放气导致锅炉内产生负压、盖子打不开，可以将放气阀打开，让空气进入，内外压力平衡后盖子就可以打开了。取无菌物品时，要严格无菌操作。同时应分类放置，顺序发放取用。
6.高压灭菌时间控制
如无菌水、栽培介质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间。
另外，含有盐分的液体漏出或溢出时，一定要及时擦干净，沿着盖子的密封圈要彻底擦干，否则会腐蚀容器和管道。?不要在爆炸性气体附近使用仪器。
03
若干问题解疑
1.哪些物品可以高压蒸汽灭菌？
不是所有的物品都可以高压蒸汽灭菌的，例如，有破坏性材料和含碱金属成份的物质，否则会导致爆炸、腐蚀内胆和内部管道或破坏垫圈。
选修1教材
2.选择121度有什么好处或者原理吗？
其实，不同的产品对温度的承受和要求是不一样的，大多数食品都是选择121°来经过15min以上来达到灭菌，以便于长期保存的目的。这个温度下能使所有的微生物杀死，包括芽孢休眠体。
但是一些食品也可能选择其他温度来杀菌，比如牛奶就是巴氏杀菌，温度只有60多度。因为温度会影响产品营养和风味，这个温度是对产品影响最小且达到的效果最好的一个选择。
当然不只是和温度有关，还有压力及时间等要求，必须这3个保证才能达到灭菌的最佳效果。
3.为什么灭菌偏偏选择121度？而不是120度或者122度呢？
这个温度是在1Kg/cm2压力下，通过物理公式克拉伯龙方程（PV=nRT）计算得到的。
4.标准大气压也要101.3KPa,怎么会设定在100KPa?,比标准大气压还要小的压力？
设定的1Kg/cm2压力，相当于100KPa，表面上看起来比标准大气压也小，按照物理学原理，其实是比大气压大100KPa，也就是说，这是压力差。计算的结果正好是121度。
04
典型试题解析
试题：下列有关高压蒸汽灭菌叙述，错误的是（ ）
A．果酒与果醋的原料不需要进行高压蒸汽灭菌
B．用于微生物培养的培养皿必须高压蒸汽灭菌
C．用于植物组织培养的培养基必须高压蒸汽灭菌
D．用于分离微生物的土壤样品必须高压蒸汽灭菌
答案：D
解析：灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。果酒和果醋的制作使用的是传统发酵技术，原料不需要进行高压蒸汽灭菌法灭菌，A正确；用于微生物培养的培养皿需要进行高压蒸汽灭菌法灭菌，B正确；植物组织培养的培养基必须高压蒸汽灭菌以防杂菌污染，C正确；分离微生物的土壤样品是实验材料，不能进行高压蒸汽灭菌，D错误。
试题2：下列关于高压蒸汽灭菌锅说法错误的是（? ）
A.高压蒸汽灭菌锅可用于培养基、生理盐水、采样器械的灭菌
B.灭菌的物品在锅内不能放太多，以免影响蒸汽流通，降低灭菌效果
C.加热时先打开排气阀，排除蒸汽冷空气后，再关闭排气阀
D.灭菌完毕，先打开排气阀放气，然后等温度下降后开盖
答案：D
解析：高压蒸汽灭菌锅可用于培养基、生理盐水、采样器械的灭菌，A正确；灭菌的物品在锅内不能放太多，以免影响蒸汽流通，降低灭菌效果，B正确；加热时先打开排气阀，排除冷空气后，再关闭排气阀，C正确；灭菌完毕，一般等温度下降后，压力降到零，再打开排气阀放气，D错误。
05
视频：高压蒸汽灭菌操作
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